什么是乳鐵蛋白？

乳鐵蛋白可以響應(yīng)各種生理和環(huán)境的變化，因此它被認(rèn)為是先天防御系統(tǒng)的關(guān)鍵組成成分。乳鐵蛋白對(duì)多種細(xì)菌、真菌、酵母、病毒和寄生蟲表現(xiàn)出強(qiáng)大的抗菌活性。它還具有抗炎和抗癌活性，并具有多種酶功能。乳鐵蛋白在維持體內(nèi)細(xì)胞鐵水平中起關(guān)鍵作用。

乳鐵蛋白添加量并不是越高越好，如果嬰幼兒配方奶粉中乳鐵蛋白含量過高，長(zhǎng)期飲用會(huì)導(dǎo)致寶寶攝入過量的鐵，易引起鐵中毒，另外體內(nèi)乳鐵蛋白含量過高時(shí)還有可能會(huì)增加腎臟負(fù)擔(dān)。

國(guó)家衛(wèi)生部2012-3-15頒布實(shí)施的《GB-14880-2012食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑使用標(biāo)準(zhǔn)》明確規(guī)定了食品中的添加劑量，每100g≤100mg。

使用對(duì)象

IAC-SEP肝素親和柱能夠特異性的純化樣品中的乳鐵蛋白，它廣泛的應(yīng)用乳制品樣品的凈化，該方法速度快、操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確性高，對(duì)提高乳制品的質(zhì)量和安全性起到十分重要的作用。

原理

肝素親和柱能夠特異性的純化樣品中的乳鐵蛋白，樣品前處理后，通過親和柱凈化，乳鐵蛋白特異性吸附在親和柱上，用淋洗液將親合柱上的雜質(zhì)除去，用洗脫液通過分離柱，將乳鐵蛋白親和柱上分離下來，最后，將洗脫液注入HPLC或LC-MS進(jìn)行測(cè)定。

樣品前處理：

1、液體奶樣品：

• 牛初乳乳鐵蛋白參考含量1-2mg/g,建議稱量2-5g.

• 普通牛奶中乳鐵蛋白參考含量小于0.5mg/g,建議稱量10-20g.

稱取 1-20g樣品（根據(jù)需要的檢測(cè)范圍確定稱量多少），置于50 mL離心管中。將20-30mL 結(jié)合緩沖液加入到離心管中，震蕩混勻；將混勻樣品轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，用結(jié)合緩沖液定容至50mL，搖勻。將樣本4℃條件下10000 RPM離心10 min，準(zhǔn)確吸取中間層液體10mL，作為上樣液。或采用微纖維過濾，準(zhǔn)確吸取濾液10 mL，作為上樣液。

2、固體樣品：（嬰幼兒配方奶粉、乳粉等）

稱取 4g(精確至0.01 g)試樣，置于250 mL 燒杯中。將70 mL 已預(yù)熱到40 ℃的結(jié)合緩沖液加入到樣品中，用玻璃棒將其混合均勻，并溶解。將樣品移入100 mL 容量瓶中，用少量的結(jié)合緩沖液分次洗滌燒杯，洗滌液一并移入容量瓶中，用結(jié)合緩沖液定容至刻度，搖勻后分別移至兩個(gè)50 mL離心管中，在4℃條件下10000RPM離心10 min，準(zhǔn)確吸取中間層液體10mL，作為上樣液。或采用微纖維過濾，準(zhǔn)確吸取濾液10 mL，作為上樣液。

3、液相色譜條件

色譜柱：Cloversil XB-C4, 5μm, 300?, 4.6×250mm

流速：1.0 mL/min

檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器，280nm

進(jìn)樣體積：50uL

流動(dòng)相：0.1%三fu乙酸與乙腈梯度洗脫，

見下表

高效液相色譜儀檢測(cè)乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)譜圖如下：

需要準(zhǔn)備的設(shè)備及試劑（中檢維康提供）